救必应胃痛片由木香、救必应、高良姜、肉桂、陈皮、甘草流浸膏、碳酸氢钠和三硅酸镁八味药构成，除甘草流浸膏外，其余七味以粉末入药，具有镇痛、解痉、制酸、健胃功效，是广西圣特药业自行研制开拓的非处方药，用于胃、十二指肠溃疡，慢性胃炎属肝胃不和证者。现行版质地尺度为国度食物药品监督处理局颁布的WS-10593（ZD-0593）-2002-2012Z[1]，其【辨认】项下无植物药（木香、救必应、肉桂、高良姜和陈皮）的显微特征辨认步伐；薄层色谱辨认步伐操作烦琐；【含量测定】项下独一橙皮苷的含量测定、碳酸氢钠和三硅酸镁的限值。本文拟建立以下步伐：（1）建立木香、救必应、肉桂、高良姜和陈皮的显微特征辨认法；（2）简化橙皮苷、桂皮醛和木香的薄层色谱辨认法，增多木香烃内酯和去氢木香烃内酯的薄层色谱辨认法；（3）简化及改良原尺度中检测橙皮苷含量的高效液相色谱法，增多木香烃内酯、去氢木香烃内酯、桂皮醛3个含量截止观念身分，建立同期测定橙皮苷、木香烃内酯、去氢木香烃内酯和桂皮醛含量的步伐。

1 仪器与试药 1.1 仪器

Waters 1525型高效液相色谱仪，DM500显微成像仪（德国徕卡显微系统有限公司），电子分析天平Merttler AE200和XS205（瑞士梅特勒公司），TLC Visualizer全自动薄层色谱成像仪（瑞士卡玛公司），超声波清洗器AS7240BT（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。

1.2 试剂

硅胶G板（青岛海欧化工场，规格：20 cm×20 cm），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

1.3 试药 1.3.1 原药材起首及批号

救必应（批号20140628），肉桂（批号20130903），陈皮（批号20141103），木香（批号20130121），高良姜（批号20150925），由广西圣特药业有限公司提供（购于广西玉林药材市集），经广西中医药大学中药决然教研室蔡毅陶冶决然之后用于推行。

1.3.2 对照药材、对照品批号及起首

救必应（批号1076-9901），肉桂（批号121363-200401），陈皮（批号120969-200507），木香（批120921-201309），高良姜（批号121263－200502），木香烃内酯（批号111524-200503），去氢木香烃内酯（批号111525-200505），橙皮苷（批号110721-200512），桂皮醛（批号110710-201418，含量99.4%），均起首于中国食物药品检定计划院。

1.3.3 样品

救必应胃痛片（批号131001、131101、140101、140102、140301、140601、141101、150101、150301、150601、151001、151201、160101）共13批，规格为0.36g·片-1，均来自广西圣特药业有限公司。

2 显微辨认步伐与扫尾 2.1 推行步伐

区分取5种原药材粉末、5种对照药材粉末和样品粉末少量，置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，在高倍镜下（400倍）不雅察。

2.2 推行扫尾

在显微镜下不雅察，5种原药材粉末、5种对照药材粉末、按处方比例搀和的对照药材粉末及样品粉末的显微图谱见图 1～13。

救必应胃痛片中以粉末入药的植物药有木香、救必应、高良姜、肉桂和陈皮，把柄《中华东说念主民共和国药典》2015年版[2]，本文通过对5种药材的原药材粉末、按处方比例搀和的原药材粉末和样品粉末进行显微辨认[3-6]，并与各自的对照药材粉末和按处方比例搀和的对照药材粉末进行比拟，扫尾发现，原药材木香、救必应、高良姜、肉桂和陈皮，与各自的对照药材具相易的显微特征，且与《中华东说念主民共和国药典》2015年版[2]要求一致；救必应胃痛片样品粉末中——木香的菊糖，肉桂的纤维，救必应的草酸钙方晶，陈皮的陈皮苷结晶，高良姜的淀粉粒，与各自对照药材及按处方比例搀和的对照药材粉末具相易的显微特征。

2 薄层色谱辨认扫尾 2.1 木香薄层色谱辨认[2]

取救必应胃痛片样品2片，研细，加甲醇10 mL，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min，滤过，滤液当作供试品溶液。取木香对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。取木香烃内酯和去氢木香烃内酯对照品适量，区分加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，当作对照品溶液。照薄层色谱法（《中华东说念主民共和国药典》2015年版四部通则0502），吸取上述溶液各5 μL、供试品溶液10 μL，区分点于归并硅胶G薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15: 5: 1）的表层溶液为伸开剂，伸开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，加热至雀斑裸露明晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上显相易激情的雀斑，如图 14（T：26 ℃；RH：60%；展距：8 cm）。

2.2 橙皮苷薄层色谱辨认[7]

按“2.1”项下步伐制备供试品溶液。取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成实足溶液，当作对照品溶液。照薄层色谱法（中华东说念主民共和国药典2015年版四部通则0502），吸取上述溶液各10μL，区分点于归并硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（10: 1.7: 1.3）的表层溶液为伸开剂，伸开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相易激情的荧光雀斑，如图 15（T：28 ℃；RH：66%；展距：9 cm）。

2.3 桂皮醛薄层色谱辨认[2]

按“2.1”项下步伐制备供试品溶液。取桂皮醛对照品适量，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，当作对照品溶液。取肉桂对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中华东说念主民共和国药典2015年版四部通则0502），吸取上述对照品溶液和对照药材溶液各5 μL、供试品溶液10 μL，区分点于归并硅胶G薄层板上，照以石油醚（60～90 ℃）-醋酸乙酯（17: 3）为伸开剂，伸开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼酒精试液。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上显相易激情的雀斑，如图 16（T：28 ℃；RH：58%；展距：10 cm）。

3 含量测定步伐与扫尾 3.1 搀和对照品溶液的制备

精密称取对照品木香烃内酯10.32 mg、去氢木香烃内酯10.09 mg，区分置100 mL量瓶中，加甲醇融解并定容，当作对照储备液A、B；精密称取对照品桂皮醛15.49 mg、橙皮苷15.30 mg，区分置50 mL量瓶中，加甲醇融解并定容，当作对照储备液C、D；区分精密吸取上述对照储备液A、B和C各1 mL、D 2 mL，置于归并10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（即质地浓度区分为木香烃内酯10.32 μg·mL-1，去氢木香烃内酯10.09 μg·mL-1，桂皮醛30.79 μg·mL-1，橙皮苷61.20 μg·mL-1）。

3.2 供试品溶液的制备

取已研细的救必应胃痛片样品0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入90%甲醇25 mL，称量，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）20 min，放冷，再称量，用90%甲醇补足减失的量，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

3.3 色谱条目与系统适用性考试[8-12]

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：35 ℃；检测波长：0～25 min：283 nm，25～60 min：225 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱：0～20 min：38%A；20～50 min：38%A→75%A；50～60 min：75%A。按上述推行条目进行测定，扫尾4种观念身分的表面板数均不低于5 000，且齐能达到基线分离，分离度大于1.5。

3.4 专属性考试

按照救必应胃痛片处方比例，区分制备不含木香、陈皮和肉桂的样品，按“3.2”项下步伐制成阴性样品溶液，进样测定。扫尾裸露阴性样品溶液各身分峰对测定无阻抑，扫尾见图 17。

3.5 线性臆想覆按

精密称取对照品木香烃内酯11.18 mg、去氢木香烃内酯10.72 mg、桂皮醛19.85 mg，区分置50 mL量瓶中，加甲醇融解并定容，当作对照储备液E、F、G；精密称取橙皮苷对照品11.88 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇融解并定容，当作对照储备液H。精密吸取对照储备液E、F、G各0.1、0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 mL和H 0.1、0.5、1.0、2.0、3.75、7.5 mL，区分置6个25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度（质地浓度约尽头于木香烃内酯0.894 4、2.236、4.472、8.944、22.36、44.72 μg·mL-1，去氢木香烃内酯0.857 6、2.144、4.288、8.576、21.77、42.88 μg·mL-1，桂皮醛1.578、3.946、7.892、15.78、39.46、78.92 μg·mL-1，橙皮苷1.901、9.504、19.01、38.02、71.76、142.6 μg·mL-1），摇匀，进样10 μL进行分析，纪录峰面积。以对照品浓度C（μg·mL-1）为横坐标，色谱峰峰面积Y为纵坐标，制作尺度弧线，求得尺度弧线的追忆方程、有臆想数，扫尾见表 1。

表 1 4个灵验身分的追忆方程、有臆想数和线性范畴 Table 1 Regression equation, R and Linear rang of four effective components 3.6 精密度考试

精密吸取搀和对照品溶液，联结进样6次，每次10 μL，以木香烃内酯、去氢木香烃内酯、橙皮苷、桂皮醛峰面积计，RSD区分为0.4%、0.9%、0.2%和0.2%。标明该步伐精密度精粹。

3.7 涌现性考试

取归并供试品溶液，室温下区分于0、2、4、8、12、24 h进样测定，把柄色谱图的峰面积来覆按木香烃内酯、去氢木香烃内酯、橙皮苷、桂皮醛的涌现性，扫尾RSD区分为0.7%、2.0%、1.6%和1.6%。标明供试品溶液在室温下24 h内能保执涌现。

3.8 类似性考试

取归并样品各6份，区分按“3.2”项下步伐制备供试品溶液，进样10 μL，测定。扫尾样品中木香烃内酯、去氢木香烃内酯、橙皮苷、桂皮醛平均含量（n=6）区分为0.054 7、0.118 8、0.958 3、0.642 2 mg·片-1，RSD区分为2.6%、2.3%、2.0%、1.4%。标明该步伐类似性精粹。

3.9 加样回收率考试

精密称取归并批（批号140101，0.36 g·片-1）已知木香烃内酯含量为0.151 8 mg·g-1、去氢木香烃内酯含量为0.330 1 mg·g-1、橙皮苷含量为2.661 9 mg·g-1、桂皮醛含量为1.784 0 mg·g-1的样品0.25 g，共6份，再精密称取橙皮苷对照品15.77 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇融解并稀释至刻度，摇匀，当作对照储备液Ⅰ；再精密称取桂皮醛对照品79.40 mg，置20 mL量瓶中，加甲醇融解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，当作对照储备液J；区分精密吸取对照储备液A（0.103 2 mg·mL-1）0.5 mL和B（0.100 9 mg·mL-1）0.8 mL、I（0.315 4 mg·mL-1）3.45 mL、J（1.973 mg·mL-1）0.25 mL，按“3.2”项下步伐操作，制备供试溶液，测定，设想回收率。扫尾见表 2。

表 2 4个灵验身分加样回收率推行扫尾（n=3） Table 2 Result of the recovery test in four effective components 3.10 样品测定

取13批救必应胃痛片样品，区分按“3.2”项下步伐制备供试品溶液，进样测定，按外标法设想含量，其含量区分为：木香烃内酯0.011 6～0.200 8 mg·片-1；去氢木香烃内酯0.084 9～0.221 9 mg·片-1；橙皮苷0.711 7～1.232 0 mg·片-1；桂皮醛0.029 5～1.007 5 mg·片-1。

4 盘考与论断 4.1 显微辨认计划

显微辨认法是中药决然步伐的主要技艺之一，特征细胞能较准确地反馈各药材的显微辨认特征。本文增多了处方中以细粉入药的木香、救必应、高良姜、肉桂和陈皮等药材的显微辨认法，完善了救必应胃痛片的定性辨认步伐，为截止该制剂定性辨认和制法工艺质地尺度提供依据。

4.2 薄层色谱辨认法

步伐改良后，原尺度中的橙皮苷、桂皮醛、木香药材等的薄层色谱辨认，均不错接收归并索求步伐“取样品2片，加甲醇10 mL，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min”制备供试品溶液，且在其相应的步伐项下，增多了肉桂、木香烃内酯和去氢木香烃内酯的辨认。不但简化了操作智商，精打细算了时辰，精打细算了试剂和试样的使用量，且优化了各自的伸开系统，幸免了氯仿和甲苯等有毒无益试剂的使用，也完善了救必应胃痛片的薄层辨认法，使该药的内在质地获取愈加全面的截止。

4.3 含量测定步伐计划 4.3.1 供试品溶液制备步伐的选拔和优化

原尺度中【含量测定】项下独一橙皮苷的含量测定，其索求步伐所以石油醚为溶剂，索氏索求2～3 h，药渣挥干溶剂后用甲醇索求场合身分。本文接收正交设想步伐优化供试品溶液的索求步伐，选拔溶剂体积、甲醇浓度和索求时辰当作覆按因素，以去氢木香烃内酯（Y1）、木香烃内酯（Y2）、桂皮醛（Y3）和橙皮苷（Y4）的得率当作探员观念，建立L9（34）正交表覆按上述三因素三水平对4个场合身分的影响，得出最优水平组合：使用90%甲醇25 mL超声处理（功率250 W，频率50 kHz）20 min制备供试品溶液。简化了操作，精打细算了时辰，且减少了试剂的用量。

4.3.2 检测波长的选拔

接收DAD检测器在200～400 nm范畴内，区分对橙皮苷、桂皮醛、木香烃内酯和去氢木香烃内酯对照品溶液进行光谱扫描，绘图DAD的3D图谱，找出最大接纳波长；再参考《中华东说念主民共和国药典》[2]中陈皮、桂枝和木香等药材含量测定项下的检测波长，和谐本色的推行操作条目，将橙皮苷和桂皮醛的检测波长设为283 nm，木香烃内酯和去氢木香烃内酯的检测波长设为225 nm。

4.3.3 流动相的选拔

参考《中华东说念主民共和国药典》2015年版[2]中陈皮、桂枝和木香等药材含量测定项下的流动相条目，并与有关文件[8-12]中流动相条目空洞分析，进行梯度洗脱（以甲醇为流动相A，水为流动相B），按以下梯度洗脱范例进行考试：① 0～20 min：35%A，20～40 min：65%A；② 0～20 min：38%A，20～40 min：38%→70%A；③ 0～20 min：38%A，20～50 min：38%→75%A，50～60 min：75%A；④ 0～20 min：38%A，20～40 min：38%→75%A。空洞分析保留时辰、表面板数、基线、杂质影响等各因素，范例③为最理思的流动相条目。原尺度中的流动相为甲醇-醋酸-水，改良为甲醇-水后，不但幸免了醋酸对色谱柱的毁伤，还能在此色谱条目下同期检测4个灵验身分。简化操作，裁减分离和检测时辰，提高了职责扫尾。

4.3.4 覆按不同型号的色谱仪、色谱柱对扫尾的影响

取批号为140101的样品，①：于高效液相色谱仪（Waters 1525）测定，区分使用不同型号的色谱柱Agilent XDB-C18、Agilent SB-Aq C18、Ultimate XB-C18、Hubble C18对其进行分离、检测，区分设想4个场合身分的含量，木香烃内酯、去氢木香烃内酯、橙皮苷和桂皮醛的RSD区分为3.0%、2.9%、2.4%和3.3%。②：于高效液相色谱仪（安捷伦Agilent 1260）测定，使用色谱柱Agilent XDB-C18进行分离、检测，与Waters 1525色谱仪中Agilent XDB-C18分离得出的扫尾进行比拟，木香烃内酯、去氢木香烃内酯、橙皮苷和桂皮醛的RD区分为1.4%、1.6%、3.7%和2.0%。

4.3.5 比拟2种不同的步伐检测橙皮苷的含量

本文按照原尺度法例的步伐，取批号为140101的样品进行橙皮苷含量测定，扫尾该步伐测得的橙皮苷含量为1.007 2 mg·片-1，与本文所测得的含量（0.958 3 mg·片-1）连接近。

4.4 论断

本文在救必应胃痛片现行版质地尺度[1]的基础上，增多了药材粉末显微辨认，改良了薄层色谱辨认，延伸了含量测定项中的场合身分测定，步伐浮浅易行、高效快速，质地可控，为完善和擢升救必应胃痛片的质地尺度提供依据，也为甄别伪劣药品和确保东说念主民公共用药安全提供参考。

测定13批次样品中木香烃内酯、去氢木香烃内酯、橙皮苷和桂皮醛含量（按外标法设想），发现各批次间木香烃内酯和去氢木香烃内酯总含量、桂皮醛含量扫尾互异较大，笔者分析形成该互异的原因可能有以下几点：第一，药材市集是中药制剂中中药材的主要起首地，当今中药材市集的品种较紊乱，且质地高下不一，这给中药制剂的质地带来很大的影响；第二，处方的制作工艺和原药材的处理亦然影响药品性量的艰苦因素，木香、陈皮、肉桂入药前需龙套成细粉，粉末需灭菌（该厂使用烘制灭菌法，115 ℃烘制30 min），打粉机职责所产生的热能和烘制进程中所使用的温度，齐有可能导致各药材所含蒸发性灵验身分亏空量大小不一；第三，厂家从购进原药材（饮片）到分娩重要，需经过一定时辰的储存期，储存环境实时辰对药材的含量也有一定的影响。

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